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福建省立医院动物实验室
[发布时间] 2006/4/26    [浏览次数]

福建省立医院动物实验室简况
一、动物实验室基本情况介绍:
(一)、实验动物设施和等级动物使用情况:
我院动物实验室于2001年分别通过清洁级鼠类动物实验室和
普通级兔类动物实验室设施条件合格验收。
现有动物实验室170平方米,内设二间清洁级鼠类实验室(有四台层流架和二台超净工作台),一间普通兔类实验室和相应的功能房和配套设施,并配备中级职称专业技术人员一名。使用符合标准的清洁级鼠类动物和普通级兔类动物,使用符合标准的饲料、垫料、饮用水,合理安排动物实验规模,根据不同的课题,提出实验用动物的品种、品系、等级及动物实验方法、操作规程,建立了动物实验记录档案,严格规范了操作规程。
(二)、实行全院动物实验集中管理:
为充分发挥动物室的作用,减少经费支出,我们实行全院动物实验集中管理制度,下发“关于动物实验工作归口管理的通知”,规定:院科教科统一管理全院的动物实验工作;归口管理范围:全院凡纳入地市(厅)级以上的科研项目或课题;由我院资助或部分资助的科研项目或课题。归口管理内容:(1)院内一切动物实验工作必须如实向院科教科申报(包括动物的数量、等级、品种、品系、实验周期、经费预算、课题组人员组成、协作单位等);(2)凡动物实验中使用医院的设施设备,需由医院(或科室)提供服务、领取相关物品等实行经济核算,交纳相关费用;(3)正常情况下,动物实验课题必须在本院动物实验室里进行,对于院动物实验室目前尚不能承担的个别实验项目,经批准后方可到外单位从事动物实验,但必须出具动物实验室合格证明书。通过上述措施,有效发挥动物实验室的作用,提高实验室的利用率,切实加强动物实验工作的管理,达到规范动物实验设施条件,使用符合标准的实验动物饲料、垫料、饮用水和动物。
(三)、课题研究得到了开展:
这几年来,共完成20多项动物实验研究课题。其中清洁级鼠类
13项,普通级兔类9项以及普通级鼠类等。承担的课题有:《低温盐水及腺苷对兔主动脉阻断致脊髓缺血保护研究》、《Nd:YAG激光对兔咽部、口腔粘膜热损伤的研究》、《几种胃肠激素对大鼠四氯化碳急性肝损伤大鼠模型的保护作用》、《Nd:YAG激光在鼻窦内窥镜手术中的应用基础研究》、《Nd:YAG激光损伤兔颈部血管的实验研究》、
《Spirulina对BALB/C鼠心肌炎的影响》、《激光白蛋白吻合肺组织实验研究》、《小伏口服液临床疗效与实验基理研究》、《益生精胶囊药效及毒理研究》、《定经合剂急性毒性实验》、《小伏口服液药效学研究》、
《中耳再建术人工听骨的组织病理学研究》、《西洛他唑预防家兔粥样狭窄血管成形术后再狭窄的实验研究》、《冠脉搭桥术后静脉移植血管再狭窄与细胞粘附分子的关系》、《关于糖尿病大鼠脂肪组织中Resistin的研究》、《羊膜在兔眼小梁切除中的应用》、《NMDA受体拮抗剂对大鼠周围神经缺血角灌注损伤的影响》、《胰岛素抵抗与基因表达》、《日本白兔血管PTCA后apolipoproteinj的表达》、《骨髓间充质干细胞移植于缺血心肌的实验研究》、《顿挫伤性白内障与HSP的表达》、《心衰时药物治疗对BNP的影响》、《用基因芯片研究2型糖尿病大鼠基因表达谱》、《白血病抑制因子促进大鼠坐骨神经再生的实验研究》,涉及内科、五官科、心内科、心外科、药剂科、中医科、眼科、骨科等科别中各领域,发挥了动物实验室应有的功能,取得了一定成效。
二、清洁级大、小鼠实验室管理操作细则:
(一)、大、小鼠实验项目申请的程序及规定
1、动物实验室项目由申请者依照《动物实验申请表》填写;并经所在科室签署意见及加盖科室公章后,交院科教科审批。
2、申请表一式两份,分别由动物实验室和课题组备案。
3、动物实验室按照实验者要求采购实验动物,在动物引进后,由实验者按要求对动物进行验收、签字。
4、实验者负责动物实验手术、操作(专用手术器械及仪器由课题组自备),术前术后动物观察、记录;需要动物实验室配合的项目,应事先以协议的形式委托。
5、动物实验中,动物实验室负责环境设施各项指标等基本符合国家规定的技术标准;提供或协助引进合格的、不同级别品种、品系动物;各种饲料、饮用水、垫料和笼具的包装消毒及供给;清洁级动物的废物处理及笼具清洗、消毒,实验后动物的处置及实验室的全面整理和消毒。
6、实验者在动物实验操作过程中,如有损坏或遗失实验室中的仪器设备等,应照价赔偿。
7、动物实验中,由于环境、笼具不洁、饲料变质或未能及时提供饲料、饮水等造成动物死亡的,由动物实验室承担责任。
8、由于实验方案或操作不当而引起动物死亡的,由实验者承担责任。
9、由于不可预料或不可抗衡的事故发生(如大范围停电、断电、电压突然升高,设施自然损坏等)而致实验失败,则由双方谅解协商解决。
10、为避免交叉感染,原则上实验室管理人员不直接参加实验操作。
11、如动物发生不明原因死亡,双方应立即相互告知,并处理好动物尸体。
12、实验者应严格按规定的操作程序进入动物实验室工作,并遵照动物实验管理制度,如有严重违反者,动物实验室管理人员可拒绝其进入,由此造成的后果由实验者承担。
13、实验者所采取的实验基本方法,有毒有害材料或试剂、危害人体的诱导物等必须事先申明,经动物实验室审定后按规定程序带入,不得擅自带进实验室,以免影响其他课题。
14、实验者动物实验收费按动物实验所购动物及实验用品实际价格收费。
(二)、动物实验人员须知
1、 进行动物实验,应事先与动物实验室联系,填写《动物实验申请表》,经批准后方可进行。
2、 实验中所需的器械、物品均需严格消毒后方可带入实验室。
3、 实验人员进入动物实验室,需按照实验室规定的程序进入。
(1)、操作时,手不可直接接触动物和消毒灭菌过的物品。操作前必须戴上灭菌过的、完好的乳胶手套或消毒过的浸塑手套。操作中手套不能接触层流架外未经消毒的物品。
(2)、操作时,层流架和超净工作台风机电压调至150V;非操作时的静态风机工作电压调至70V。层流架各笼位的密封窗不要多扇同时开,并应随时关闭。
(3)、操作顺序:从左到右,从上到下。必须将动物饲育盒边过滤帽迅速移到超净工作台内,然后打开过滤帽进行操作。
4、 实验者原则上应每天进入动物实验室观察,如发现有动物异常应及时处理。
5、 非实验人员不得擅自进入动物实验室。
6、 实验后,不必要的仪器、物品、样本或死亡的动物,应在离开实验室时带出。
7、 实验者不得动用非本课题动物,一旦发现将严肃处理。
8、 实验者不得擅自搬动动物实验室的设备,如有损坏者,按价赔偿。
9、 实验全部结束,实验者应立即通知动物实验室管理人员,以便及时清理、消毒、结帐,并做好迎接新课题的一切准备工作。
(三)、层流架操作规程
1、在正常运转时,将层流架的电压表调至70V,在开层流架门时将电压表调至150V,所有的门关闭后将电压表调回至70V。
2、左手开门,右手取层流架中的鼠盒,取出鼠盒后及时将门关上,以免空气倒流进层流架。
3、取鼠盒时,连同鼠盒上的过滤帽一同取出,迅速移至超净工作台内(或该层流架的操作层)。
4、 过滤帽只能在超净工作台中打开,进行实验操作。
5、 超净工作台内的实验完毕,即在该工作台盖上过滤帽移回原层流架,随即关闭层流架门。
6、在第一次放入鼠盒之前,需用消毒液将层流架的四壁擦净,然后才能放入鼠盒。
7、对于大批层流架的鼠盒取出,原则上是至上而下,从左到右依次进行。
8、取动物的摄子需备数把,均浸泡在消毒液中,轮流使用。
9、实验操作完毕,需打开紫外灯作一定量时间的照射消毒。
10、实验人员进行操作时,需戴一次性灭菌手套。
(四)、层流架内环境指标控制标准
温度:18--29℃
日温差:=<3℃
相对湿度:40—70%
空气处理清洁度:100,000级
压力差:20—50pa
氨浓度:=<14mg/M3
噪声:=<60DB
工作照度:150—300LUX
动物照度:20—100LUX
落菌数:(个/皿时):>12.2
换气量:10-20次/小时
气流速度:=<0.18(M/S)
昼夜明暗交替时间:各12小时
(五)、高压饲料及饮用水的准备和包装方法
1、饲料需用可高压灭菌的高压饲料。
2、检查饲料质量,如发现饲料有霉变、结块及有虫蛀的情况,不得使用。
3、将饲料装贮槽。
4、 将清洁水或酸化水(PH3.0酸化)装入饮水瓶中.
5、把饮水瓶装入饮水瓶柜。
6、 贮槽和饮水瓶必须用消毒布袋封包,布袋一定要扎紧袋口,以尽可能与外界隔离为原则(如暴露空气时间较长,则需用2-3层布包裹,用脱皮法进入实验室)。
(六)、高压灭菌操作规则
1、通电前将蒸气发生器加满水,关闭放汽阀,使用过程应经常观察水位变化,出现缺水,及时关闭电源,加水后重新启动。
2、操作前30分钟接通蒸汽发生电源。
3、装入消毒物品,装置占内存空间的80%,物品间留有一定间隙,密封门关上,转动手轮7—9圈,使门不漏汽为止。
4、调整压力表,待夹层压力达预定值0.11-0.13Mpa121℃(或0.14-0.16Mpa125℃)时,转动蒸汽控制总阀至“消毒”位使蒸汽进入灭菌室,灭菌室内压力和温度逐渐上升,当温度达到预定灭菌温度时灭菌计时开始(121℃20分钟;125℃15分钟)。
5、当消毒时间达到时切断蒸汽发生器电源,并将控制总阀拨至“排汽”位置,待真空压力表指针回到“0”后,即可打开密封门,取出物品。
6、如果灭菌物品须干燥,将控制总阀拨至“干燥”位置,当灭菌压力下降至约-0.02Mpa时,保持15-20分钟,关闭电源。同时将控制总阀转到“关闭”位置,待灭菌压力回到“0”位时,打开密封门,取出灭菌物品。
7、消毒柜周围不得堆放其它物品,并保持清洁。
8、 消毒人员不得随意离开工作岗位,应注意观察部件运行情况,以免发生事故。
9、本消毒柜不进行液体类消毒。
10、每次加水前必须检查内室的过滤网,要注意内室的清洁,做到定期打扫。
11、安全阀定期人工启动一次。
(七)、实验室的例行清洁卫生和例行消毒规定
1、实验室内环境符合清洁级动物实验室级别的要求,外环境整洁。
2、 实验结束后对相应的实验设施作一次清洁消毒,再次实验前作一次加强消毒。
3、常用消毒剂应每周更换,以保证其消毒性能。
4、 消毒前后物品应严格分开保存。
5、 每隔一定时间更换消毒剂品种,以防抗药性。
三、普通级兔实验室饲养、观察操作规程
(一)、普通级兔实验项目申请执行程序及规定
1、实验者进行兔实验项目前,应事先与动物实验室联系,提出申请,并依照《动物实验申请表》的要求填写;并经所在科室签署意见及加盖科室公章后,交院科教科审批。
2、申请表一式二份,分别由动物实验室和课题组备案。
3、动物实验室按照实验者要求采购实验用兔,在兔引进后,由实验者按要求对动物进行验收、签字;术前术后动物观察、记录(专用手术器械及仪器由课题组自备);动物实验后应每天来观察一次自己课题实验后动物,并做好记录。需要动物实验室配合的项目,应事先以协议的形式委托。
4、实验中,动物实验室负责环境设施各项指标等基本符合国家规定的技术标准;负责各种饲料、饮用水供给;普通级兔子废物处理及笼具清洗、消毒;实验后动物的处置及实验室的全面整理和消毒。以及饲养管理与健康监督。
5、实验后兔发生异常情况或死亡,应在发现后立即通知实验者,经双方分析协商,对异常情况或死亡动物立即进行处置。
6、 实验兔的尸体解剖由课题实验者进行,动物实验室管理人员协助工作。
7、 解剖后动物的处理由动物实验室负责。
(二)、实验兔引进验收标准
1、体格健壮,外形正常,肥度适中,四肢有力,运动活泼。
2、 眼睛鲜明有精神,无分泌物,被毛光泽,紧贴身体,不脱毛。
3、雌雄大致各半,未做过实验。
4、肛门干净,粪便正常,不拉稀,无粘液。呼吸正常,鼻孔干净,无分泌物。
5、门齿整齐,不流口涎。耳内干净,无耳疥。脚不短,颜色鲜红,无疥癣。
6、 有特殊要求,按实验需要引进验收。
7、实验兔生产单位能出具由实验动物管理机构认定的、相应等级的实验动物质量合格证书。
(三)、实验兔喂食与饮水规定(包括新兔自动饮水的调教)
1、实行定时定量喂食,不喂发霉变质饲料,保证喂好、喂够又不浪费。每天清扫后,分上、下午两次定时定量喂料。
2、 喂料前,应先洗净手。喂料时,要用料勺分配,不得用手抓。
3、 如发现食具内有粪便或变质饲料时应清洗消毒后再用。
4、保证实验兔自由饮用清洁而新鲜的自来水。
5、做好新兔学会自动饮水的调教。
(四)、兔实验室的例行清洁卫生及消毒规定
1、兔实验室(在做实验期间)须每天打扫兔笼,清除粪便,做到无积毛,无粪便,清洗饲具,最后扫清和拖干地面。
2、擦洗兔固定架,做到无血迹、无积毛、干净整洁。
3、每次动物实验结束后,不论兔笼使用多久,必须清洗消毒。
4、备用的物品(食具、饮水瓶、笼具等)清洗干净后,堆放整齐,安放有序。
(五)、动物实验室卫生防疫制度
1、严禁非工作人员进入动物实验室。凡参观、学习等人员须经负责人同意,由专人陪同,并遵守有关规定方可进入实验室。
2、 严禁实验室工作人员将非本室物品及饲养用具带入实验室,饲养用具严禁串用。
3、实验前后对相对的实验设施作一次清洁消毒。
4、定期对饲养室、笼器具进行消毒。
5、定期进行动物质量自检,并积极接受省实验动物质检站质量抽检。对可疑动物采取相应的隔离、检疫、确诊、处理等措施。
6、 一旦发生疫情,应立即上报,以便及时采取措施,防止疫情扩散。
7、工作人员定期预防接种和体检,建立健康档案,有人畜共患病者调换工作岗位。
(六)、普通级动物实验室环境指标控制标准
温度:18--29℃
相对湿度:40—70%
氨浓度=<14mg/M3
噪声:=<60DB
工作照度:150—300LUX
动物照度:20—100LUX
昼夜明暗交替时间各12小时
常用灭菌消毒液的选择及配置
0.5---1.0% 过氧乙酸 用于空气喷雾
1:50 新洁而灭 用于物体表面擦拭
3.0-5.0% 来苏尔 用于物体表面擦拭
1:20 碘伏 用于物体表面擦拭
1:50 碘伏 用于浸泡物品
2% 戊二醛 用于浸泡物品或空气喷雾
福尔马林 按15ml/M3福尔马林加7.5g高锰酸钾(需用水喷湿动物房的地面、墙 壁和一切用具),熏蒸24小时后换进新鲜空气
文华强效消毒剂 用于物体表面擦拭、浸泡物品和空气喷雾
动物实验室管理人员岗位职责
1、 严格遵守医院的一切规章制度和考勤考核制度,工作时间坚守工作岗位。
2、 对实验者做好热情接待和仔细的解释工作。
3、 督促实验者执行有关的操作规程。
4、 严格执行各种消毒物品的操作规程。
5、 对于实验中发生的意外或事故,及时向上级汇报,并按程序中的有关条款执行。
6、 安排人员定时做好动物实验室内外整洁工作,以及各种饲料、饮水、垫料和笼具的包装消毒及供给,动物的废物处理及笼具的清洗、消毒。
7、 应工作疏忽造成动物死亡的,应作必要的处理。
8、 每次动物实验前,应按动物实验执行程序及规定执行,实验后做好实验登记,并按规定及时收取动物实验费。
9、 管理工作人员应做好熟悉使用实验室的有关设备,定期自行维护保养,协助专业维修。
动物实验室工作记录
1、 做好购买动物的记录、死亡记录和室内温湿记录。
2、 做好各种实验项目登记、实验日期、实验进展情况及实验结束后的结帐收费工作。
3、 实验室笼具上的标牌清晰,项目登记详细,标牌与动物实验完全相符,不得有误。
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